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10703423(小妮-UniqueGene

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iTRAQ蛋白定量


iTRAQisobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由AB SCIEX公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝对定量技术,利用多种同位素试剂标记蛋白多肽N末端或赖氨酸侧链基团,经高精度质谱仪串联分析,可同时比较多达8种样品之间的蛋白表达量,是近年来定量蛋白质组学中应用最广泛的高通量筛选技术。


技术特点

1、灵敏度高:可检测出较低丰度蛋白,胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等;

2、分离能力强:可分离出酸/碱性蛋白,小于10K或大于200K的蛋白、难溶性蛋白;

3、高通量:可同时对8个样本进行分析,特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的样本的差异蛋白分析;

4、结果可靠准确:定性与定量同步进行,同时得出鉴定和定量结果,重复样品间的蛋白表达量相关性可达到0.95以上;

5、自动化程度高:液质连用,自动化操作,分析速度快,分离效果好。


适用范围

适用于任何类型的样本;

一次最多能标记8个样本;

要求物种具有蛋白质参考数据库、EST序列(转录组)或基因组注释信息。





  
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技术参数


样品要求

1. 动物组织:要求干重不少于100 mg

2. 植物组织和菌体:要求干重不少于2 g

3. 细胞样品:要求细胞数大于5×106

4. 体液样品:全血要求5 ml 以上;血清/血浆要求500 μl 以上;尿液需50 ml 以上(送样前需1000g离心5min,弃去沉淀);其他体液(唾液、羊水、脑脊液等)要求5 ml 以上。为了避免溶血所致的蛋白干扰,一般不建议送全血;

5. 富含杂质或蛋白质含量低的样品(如植物的根、木质部、韧皮部组织等):要求干重不少于5 g,酌情考虑;

6. 蛋白质提取物:要求浓度不少于1 μg/μl,蛋白量不少于500 μg

7. 肽段分析:消化前蛋白量不少于50μg

项目周期

55个工作日

分析内

1、iTRAQ鉴定

a.  鉴定结果统计

b.  重复性分析

c.  Unique肽段数分布

d.  肽段长度分布

e.  蛋白覆盖度分布;

2. iTRAQ定量

a.  定量信息统计

b.  蛋白质丰度比(FC)分布

c.  表达量层次聚类分析;

3. 蛋白质功能注释

a.  包括GO注释

b.  COG注释

c.  Pathway代谢通路注释;

4. 差异蛋白的富集分析

a.  包括差异蛋白的GO富集分析

b.  差异蛋白的Pathway富集分析。